Nematodi ya paini ni endoparasite ya kuhama inayojulikana kusababisha hasara kubwa za kiuchumi katika mifumo ikolojia ya misitu ya paini. Utafiti huu unapitia shughuli za kuua nematodi za indole zilizo na halojeni dhidi ya nematodi ya paini na utaratibu wao wa utendaji. Shughuli za kuua nematodi za 5-iodoindole na avermectin (udhibiti chanya) dhidi ya nematodi ya paini zilikuwa sawa na za juu katika viwango vya chini (10 μg/mL). 5-iodoindole ilipunguza uzaaji, shughuli za uzazi, vifo vya kiinitete na mabuu, na tabia ya locomotor. Mwingiliano wa molekuli wa ligandi na vipokezi maalum vya kloridi vilivyo na glutamate maalum ya kloridi unaunga mkono wazo kwamba 5-iodoindole, kama avermectin, hufungamana kwa karibu na eneo linalofanya kazi la kipokezi. 5-Iodoindole pia ilisababisha mabadiliko mbalimbali ya phenotypic katika nematodi, ikiwa ni pamoja na kuanguka/kupungua kwa viungo visivyo vya kawaida na kuongezeka kwa utupu. Matokeo haya yanaonyesha kwamba vakuli zinaweza kuchukua jukumu katika kifo kinachosababishwa na methylation ya nematodi. Muhimu zaidi, 5-iodoindole haikuwa na sumu kwa spishi zote mbili za mimea (kabichi na figili). Hivyo, utafiti huu unaonyesha kwamba matumizi ya iodoindole chini ya hali ya mazingira yanaweza kudhibiti uharibifu wa mnyauko wa misonobari.
Nematodi ya mbao za pine (Bursaphelenchus xylophilus) ni ya nematodi ya mbao za pine (PWN), nematodi za endoparasitic zinazohama zinazojulikana kusababisha uharibifu mkubwa wa kiikolojia kwa mifumo ikolojia ya misitu ya pine1. Ugonjwa wa mnyauko wa pine (PWD) unaosababishwa na nematodi ya mbao za pine unakuwa tatizo kubwa katika mabara kadhaa, ikiwa ni pamoja na Asia na Ulaya, na Amerika Kaskazini, nematodi huharibu spishi za pine zilizoletwa1,2. Kupungua kwa miti ya pine ni tatizo kubwa la kiuchumi, na matarajio ya kuenea kwake duniani kote yanatia wasiwasi3. Spishi zifuatazo za pine hushambuliwa zaidi na nematodi: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, na Pinus radiata4. Nematodi ya pine ni ugonjwa mbaya ambao unaweza kuua miti ya pine ndani ya wiki au miezi ya maambukizi. Zaidi ya hayo, milipuko ya nematodi ya pine ni ya kawaida katika mifumo mbalimbali ya ikolojia, kwa hivyo minyororo ya maambukizi endelevu imeanzishwa1.
Bursaphelenchus xylophilus ni nematodi ya mimea-vimelea inayotoka katika familia kubwa ya Aphelenchoidea na clade 102.5. Nematodi hula fangasi na huzaliana katika tishu za miti ya misonobari, na kukua katika hatua nne tofauti za mabuu: L1, L2, L3, L4 na mtu mzima1,6. Chini ya hali ya uhaba wa chakula, nematodi ya misonobari hupita katika hatua maalum ya mabuu - dauer, ambayo huharibu vekta yake - mende wa gome la misonobari (Monochamus alternatus) na kuhamishiwa kwenye miti ya misonobari yenye afya. Katika wenyeji wenye afya, nematodi huhama haraka kupitia tishu za mimea na kula seli zenye parenkaima, ambayo husababisha athari kadhaa za hypersensitivity, kunyauka kwa misonobari na kifo ndani ya mwaka mmoja baada ya maambukizi1,7,8.
Udhibiti wa kibiolojia wa viwavi wa paini umekuwa changamoto kwa muda mrefu, huku hatua za karantini zikianza karne ya 20. Mikakati ya sasa ya kudhibiti viwavi wa paini ikihusisha kimsingi matibabu ya kemikali, ikiwa ni pamoja na ufukizaji wa kuni na upandikizaji wa viwavi wa nematic kwenye mashina ya miti. Viwavi wa nematici wanaotumika sana ni avermectin na avermectin benzoate, ambao ni wa familia ya avermectini. Kemikali hizi za gharama kubwa zina ufanisi mkubwa dhidi ya spishi nyingi za viwavi na huchukuliwa kuwa salama kimazingira9. Hata hivyo, matumizi ya mara kwa mara ya viwavi hawa wa nematici yanatarajiwa kuunda shinikizo la uteuzi ambalo karibu litasababisha kuibuka kwa viwavi sugu vya paini, kama ilivyoonyeshwa kwa wadudu kadhaa waharibifu, kama vile Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella na viwavi wa Trichostrongylus colubriformis na Ostertagia circumcincta, ambavyo vimekua polepole na upinzani dhidi ya avermectini10,11,12. Kwa hivyo, mifumo ya upinzani inahitaji kusomwa mara kwa mara na viwavi wa nematici kuchunguzwa kila mara ili kupata hatua mbadala, za gharama nafuu na rafiki kwa mazingira za kudhibiti PVD. Katika miongo ya hivi karibuni, waandishi kadhaa wamependekeza matumizi ya dondoo za mimea, mafuta muhimu na tete kama mawakala wa kudhibiti nematodi13,14,15,16.
Hivi majuzi tulionyesha shughuli ya kuua nemati ya indole, molekuli ya ishara ya kati ya seli na kati ya ufalme, katika Caenorhabditis elegans 17. Indole ni ishara iliyoenea ndani ya seli katika ikolojia ya vijidudu, ikidhibiti kazi nyingi zinazoathiri fiziolojia ya vijidudu, uundaji wa spora, uthabiti wa plasmidi, upinzani wa dawa, uundaji wa biofilm, na virulence 18, 19. Shughuli ya indole na derivatives yake dhidi ya vijidudu vingine vya pathogen haijasomwa. Katika utafiti huu, tulichunguza shughuli ya kuua nemati ya indole 34 dhidi ya vijidudu vya paini na kufafanua utaratibu wa utendaji wa 5-iodoindole yenye nguvu zaidi kwa kutumia hadubini, upigaji picha wa muda, na majaribio ya kuweka molekuli, na kutathmini athari zake za sumu kwenye mimea kwa kutumia jaribio la kuota mbegu.
Viwango vya juu (>1.0 mM) vya indole vimeripotiwa hapo awali kuwa na athari ya kuua nematodi17. Kufuatia matibabu ya B. xylophilus (hatua mchanganyiko za maisha) kwa kutumia indole au viambato 33 tofauti vya indole kwa 1 mM, vifo vya B. xylophilus vilipimwa kwa kuhesabu nematodi walio hai na waliokufa katika vikundi vya kudhibiti na kutibiwa. Indole tano zilionyesha shughuli muhimu za kuua nematodi; uhai wa kikundi cha kudhibiti ambacho hakijatibiwa ulikuwa 95 ± 7% baada ya saa 24. Kati ya indole 34 zilizojaribiwa, 5-iodoindole na 4-fluoroindole kwa 1 mM zilisababisha vifo 100%, huku 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-kaboksilati, na 7-iodoindole zikisababisha vifo vya takriban 50% (Jedwali 1).
Athari ya 5-iodoindole kwenye uundaji wa vakuli na umetaboli wa nematodi ya mbao za pine. (A) Athari ya avermectin na 5-iodoindole kwenye nematodi za kiume zilizokomaa, (B) mayai ya nematodi ya hatua ya L1 na (C) umetaboli wa B. xylophilus, (i) vakuli hazikuonekana baada ya saa 0, matibabu yalisababisha (ii) vakuli, (iii) mkusanyiko wa vakuli nyingi, (iv) uvimbe wa vakuli, (v) muunganiko wa vakuli na (vi) uundaji wa vakuli kubwa. Mishale nyekundu inaonyesha uvimbe wa vakuli, mishale ya bluu inaonyesha muunganiko wa vakuli na mishale nyeusi inaonyesha vakuli kubwa. Upau wa kipimo = 50 μm.
Kwa kuongezea, utafiti huu pia ulielezea mchakato mfuatano wa kifo kinachosababishwa na methane katika nematodi za paini (Mchoro 4C). Kifo cha kimethanogenic ni aina isiyo ya apoptotiki ya kifo cha seli inayohusishwa na mkusanyiko wa vakuli maarufu za saitoplazimu27. Kasoro za kimofolojia zilizoonekana katika nematodi za paini zinaonekana kuwa zinahusiana kwa karibu na utaratibu wa kifo kinachosababishwa na methane. Uchunguzi wa hadubini kwa nyakati tofauti ulionyesha kuwa vakuli kubwa ziliundwa baada ya saa 20 za kuathiriwa na 5-iodoindole (0.1 mM). Vakuli za hadubini zilizingatiwa baada ya saa 8 za matibabu, na idadi yao iliongezeka baada ya saa 12. Vakuli kadhaa kubwa zilizingatiwa baada ya saa 14. Vakuli kadhaa zilizounganishwa zilionekana wazi baada ya saa 12-16 za matibabu, ikionyesha kwamba muunganiko wa vakuli ndio msingi wa utaratibu wa kifo cha methanogenic. Baada ya saa 20, vakuli kadhaa kubwa zilipatikana kote kwenye minyoo. Uchunguzi huu unawakilisha ripoti ya kwanza ya metuosis katika C. elegans.
Katika minyoo iliyotibiwa na iodoindole 5, mkusanyiko na kupasuka kwa vakuli pia kulionekana (Mchoro 5), kama inavyothibitishwa na kupinda kwa minyoo na kutolewa kwa vakuli kwenye mazingira. Usumbufu wa vakuli pia ulionekana kwenye utando wa ganda la yai, ambao kwa kawaida huhifadhiwa bila kuathiriwa na L2 wakati wa kuanguliwa (Mchoro wa Nyongeza S2). Uchunguzi huu unaunga mkono ushiriki wa mkusanyiko wa umajimaji na kushindwa kwa osmoregulatory, pamoja na jeraha linaloweza kurekebishwa la seli (RCI), katika mchakato wa uundaji wa vakuli na usaha (Mchoro 5).
Kwa kudhania jukumu la iodini katika uundaji wa vakuli ulioonekana, tulichunguza shughuli ya kuua vijidudu ya iodini ya sodiamu (NaI) na iodini ya potasiamu (KI). Hata hivyo, katika viwango (0.1, 0.5 au 1 mM), havikuathiri uhai wa vijidudu au uundaji wa vakuli (Mchoro wa Nyongeza S5), ingawa 1 mM KI ilikuwa na athari kidogo ya kuua vijidudu. Kwa upande mwingine, 7-iodoindole (1 au 2 mM), kama 5-iodoindole, ilisababisha vakuli nyingi na mabadiliko ya kimuundo (Mchoro wa Nyongeza S6). Iodoindole mbili zilionyesha sifa zinazofanana za phenotypic katika vijidudu vya paini, ilhali NaI na KI hazikuonyesha. Cha kufurahisha ni kwamba, indole haikusababisha uundaji wa vakuli katika B. xylophilus katika viwango vilivyojaribiwa (data haijaonyeshwa). Hivyo, matokeo yalithibitisha kwamba mchanganyiko wa indole-iodini unawajibika kwa uundaji wa vakuli na umetaboli wa B. xylophilus.
Miongoni mwa indoles zilizojaribiwa kwa shughuli ya kuua nematic, 5-iodoindole ilikuwa na faharisi ya juu zaidi ya kuteleza ya -5.89 kcal/mol, ikifuatiwa na 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), na indole (-4.03) (Mchoro 6). Kifungo kikubwa cha hidrojeni cha uti wa mgongo cha 5-iodoindole kwa leusini 218 huimarisha kifungamano chake, ilhali viambato vingine vyote vya indole hufungamana na serine 260 kupitia vifungo vya hidrojeni vya mnyororo wa kando. Miongoni mwa iodoindoli zingine zilizoundwa, 2-iodoindoli ina thamani ya kufunga ya -5.248 kcal/mol, ambayo ni kutokana na kifungo chake kikuu cha hidrojeni na leusini 218. Viungo vingine vinavyojulikana ni pamoja na 3-iodoindoli (-4.3 kcal/mol), 4-iodoindoli (-4.0 kcal/mol), na 6-fluoroindoli (-2.6 kcal/mol) (Mchoro wa Nyongeza S8). Indole nyingi zenye halojeni na indole zenyewe, isipokuwa 5-iodoindole na 2-iodoindole, huunda kifungo na serine 260. Ukweli kwamba kifungo cha hidrojeni na leusini 218 ni dalili ya kufungamana kwa ufanisi kwa kipokezi-ligandi, kama ilivyoonekana kwa ivermectin (Mchoro wa Nyongeza S7), unathibitisha kwamba 5-iodoindole na 2-iodoindole, kama ivermectin, hufungamana kwa nguvu kwenye eneo linalofanya kazi la kipokezi cha GluCL kupitia leusini 218 (Mchoro 6 na Mchoro wa Nyongeza S8). Tunapendekeza kwamba kufungamana huku kunahitajika ili kudumisha muundo wa vinyweleo wazi vya mchanganyiko wa GluCL na kwamba kwa kufungamana kwa nguvu kwenye eneo linalofanya kazi la kipokezi cha GluCL, 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin na ivermectin hivyo hudumisha mfereji wa ioni wazi na kuruhusu ufyonzaji wa maji.
Ufungashaji wa molekuli wa indole na indole iliyo na halojeni kwenye GluCL. Mielekeo ya kuunganisha ya (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, na (D) ligandi za 5-iodoindole kwenye eneo linalofanya kazi la GluCL. Protini inawakilishwa na utepe, na vifungo vya hidrojeni vya uti wa mgongo vinaonyeshwa kama mistari yenye madoadoa ya manjano. (A′), (B′), (C′), na (D′) vinaonyesha mwingiliano wa ligandi zinazolingana na mabaki ya amino asidi yanayozunguka, na vifungo vya hidrojeni vya mnyororo wa kando vinaonyeshwa na mishale yenye madoadoa ya waridi.
Majaribio yalifanywa ili kutathmini athari ya sumu ya 5-iodoindole kwenye kuota kwa mbegu za kabichi na figili. 5-iodoindole (0.05 au 0.1 mM) au avermectin (10 μg/mL) haikuwa na athari kubwa au haikuwa na athari yoyote kwenye kuota kwa awali na kuota kwa miche (Mchoro 7). Zaidi ya hayo, hakuna tofauti kubwa iliyopatikana kati ya kiwango cha kuota cha vidhibiti visivyotibiwa na mbegu zilizotibiwa na 5-iodoindole au avermectin. Athari kwenye urefu wa mzizi mkuu na idadi ya mizizi ya pembeni iliyoundwa haikuwa kubwa, ingawa 1 mM (mara 10 ya mkusanyiko wake hai) ya 5-iodoindole ilichelewesha kidogo ukuaji wa mizizi ya pembeni. Matokeo haya yanaonyesha kuwa 5-iodoindole si sumu kwa seli za mimea na haiingilii michakato ya ukuaji wa mimea katika viwango vilivyosomwa.
Athari ya 5-iodoindole kwenye kuota kwa mbegu. Kuota, kuchipua na mizizi ya pembeni ya mbegu za B. oleracea na R. raphanistrum kwenye Murashige na Skoog agar medium ikiwa na au bila avermectin au 5-iodoindole. Kuota kulirekodiwa baada ya siku 3 za kuota kwa joto la 22°C.
Utafiti huu unaripoti visa kadhaa vya mauaji ya nematodi na indoles. Muhimu zaidi, hii ni ripoti ya kwanza ya iodoindoles kusababisha methylation (mchakato unaosababishwa na mkusanyiko wa vakuli ndogo ambazo hujikusanya polepole na kuwa vakuli kubwa, hatimaye kusababisha kupasuka kwa utando na kifo) katika sindano za paini, huku iodoindoles ikionyesha sifa muhimu za kuua nematodi sawa na zile za avermectin ya nematicide ya kibiashara.
Indole zimeripotiwa hapo awali kuwa na kazi nyingi za kuashiria katika prokariyoti na yukariyoti, ikiwa ni pamoja na kuzuia/kuunda biofilm, kuishi kwa bakteria, na kusababisha magonjwa19,32,33,34. Hivi karibuni, athari zinazowezekana za matibabu ya indole zilizo na halojeni, alkaloidi za indole, na derivatives za indole zilizotengenezwa nusu zimevutia shauku kubwa ya utafiti35,36,37. Kwa mfano, indole zilizo na halojeni zimeonyeshwa kuua seli za Escherichia coli zinazoendelea na Staphylococcus aureus37. Kwa kuongezea, ni jambo la kuvutia kisayansi kusoma ufanisi wa indole zilizo na halojeni dhidi ya spishi zingine, jenasi, na falme, na utafiti huu ni hatua kuelekea kufikia lengo hili.
Hapa, tunapendekeza utaratibu wa kifo kinachosababishwa na iodoindole 5 katika C. elegans kulingana na jeraha linaloweza kurekebishwa la seli (RCI) na methylation (Michoro 4C na 5). Mabadiliko ya uvimbe kama vile uvimbe na kuzorota kwa vacuolar ni viashiria vya RCI na methylation, vinavyoonyeshwa kama vacuoles kubwa kwenye saitoplazimu 48,49. RCI huingilia uzalishaji wa nishati kwa kupunguza uzalishaji wa ATP, na kusababisha kushindwa kwa pampu ya ATPase, au kuvuruga utando wa seli na kusababisha mtiririko wa haraka wa Na+, Ca2+, na maji 50,51,52. Vacuoles za ndani ya saitoplazimu hujitokeza katika seli za wanyama kutokana na mkusanyiko wa umajimaji kwenye saitoplazimu kutokana na mtiririko wa Ca2+ na maji 53. Cha kufurahisha ni kwamba, utaratibu huu wa uharibifu wa seli unaweza kurekebishwa ikiwa uharibifu ni wa muda mfupi na seli zinaanza kutoa ATP kwa muda fulani, lakini ikiwa uharibifu utaendelea au unazidi kuwa mbaya, seli hufa.54 Uchunguzi wetu unaonyesha kwamba minyoo iliyotibiwa na 5-iodoindole haiwezi kurejesha biosynthesis ya kawaida baada ya kukabiliwa na hali ya mkazo.
Aina ya methylation inayosababishwa na iodini 5 katika B. xylophilus inaweza kuwa kutokana na uwepo wa iodini na usambazaji wake wa molekuli, kwani 7-iodoindole ilikuwa na athari ndogo ya kuzuia B. xylophilus kuliko 5-iodoindole (Jedwali 1 na Mchoro wa Nyongeza S6). Matokeo haya yanaendana kwa kiasi na tafiti za Maltese et al. (2014), ambao waliripoti kwamba uhamisho wa sehemu ya nitrojeni ya pyridyl katika indole kutoka para- hadi meta-position uliondoa uvamizi, kizuizi cha ukuaji, na sumu ya seli katika seli za U251, ikidokeza kwamba mwingiliano wa molekuli na eneo maalum linalofanya kazi katika protini ni muhimu27,44,45. Mwingiliano kati ya indole au indole zilizo na halojeni na vipokezi vya GluCL vilivyozingatiwa katika utafiti huu pia vinaunga mkono wazo hili, kwani iodoindole 5 na 2-iodoindole zilipatikana kuunganishwa na vipokezi vya GluCL kwa nguvu zaidi kuliko indole zingine zilizochunguzwa (Mchoro 6 na Mchoro wa Nyongeza S8). Iodini katika nafasi ya pili au ya tano ya indole iligundulika kuungana na leusini 218 ya kipokezi cha GluCL kupitia vifungo vya hidrojeni vya uti wa mgongo, ilhali indole zingine zenye halojeni na indole zenyewe huunda vifungo dhaifu vya hidrojeni vya mnyororo wa kando na serine 260 (Mchoro 6). Kwa hivyo tunadhania kwamba ujanibishaji wa halojeni una jukumu muhimu katika kuchochea kuzorota kwa vacuolar, ilhali kufungwa kwa 5-iodoindole huweka njia ya ioni wazi, na hivyo kuruhusu mtiririko wa haraka wa maji na kupasuka kwa vacuole. Hata hivyo, utaratibu wa kina wa utekelezaji wa 5-iodoindole bado haujabainishwa.
Kabla ya matumizi ya vitendo ya 5-iodoindole, athari yake ya sumu kwenye mimea inapaswa kuchambuliwa. Majaribio yetu ya kuota mbegu yalionyesha kuwa 5-iodoindole haikuwa na athari mbaya kwenye kuota kwa mbegu au michakato ya ukuaji inayofuata katika viwango vilivyosomwa (Mchoro 7). Kwa hivyo, utafiti huu unatoa msingi wa matumizi ya 5-iodoindole katika mazingira ya ikolojia ili kudhibiti madhara ya minyoo ya misonobari kwa miti ya misonobari.
Ripoti za awali zimeonyesha kuwa tiba inayotegemea indole inawakilisha mbinu inayowezekana ya kushughulikia tatizo la upinzani wa viuavijasumu na ukuaji wa saratani55. Zaidi ya hayo, indoles zina shughuli za kuua bakteria, kupambana na saratani, antioxidant, kupambana na uchochezi, kupambana na kisukari, kupambana na virusi, kupambana na kuenea kwa virusi na kupambana na kifua kikuu na zinaweza kutumika kama msingi mzuri wa maendeleo ya dawa56,57. Utafiti huu unaonyesha kwa mara ya kwanza uwezekano wa matumizi ya iodini kama wakala wa kupambana na vimelea na dawa za kutuliza maumivu.
Avermectin iligunduliwa miongo mitatu iliyopita na ilishinda Tuzo ya Nobel mnamo 2015, na matumizi yake kama dawa ya kuua wadudu bado yanaendelea kikamilifu. Hata hivyo, kutokana na ukuaji wa haraka wa upinzani dhidi ya avermectin katika minyoo na wadudu waharibifu, mkakati mbadala, wa gharama nafuu, na rafiki kwa mazingira unahitajika ili kudhibiti maambukizi ya PWN katika miti ya misonobari. Utafiti huu pia unaripoti utaratibu ambao 5-iodoindole huua minyoo ya misonobari na kwamba 5-iodoindole ina sumu ndogo kwa seli za mimea, ambayo hufungua matarajio mazuri kwa matumizi yake ya kibiashara ya siku zijazo.
Majaribio yote yaliidhinishwa na Kamati ya Maadili ya Chuo Kikuu cha Yeungnam, Gyeongsan, Korea, na mbinu hizo zilifanywa kwa mujibu wa miongozo ya Kamati ya Maadili ya Chuo Kikuu cha Yeungnam.
Majaribio ya kuangua mayai yalifanywa kwa kutumia taratibu zilizowekwa43. Ili kutathmini viwango vya kuangua (HR), minyoo mikubwa ya siku 1 (takriban wanawake 100 na madume 100) walihamishiwa kwenye sahani za Petri zenye kuvu na kuruhusiwa kukua kwa saa 24. Kisha mayai yalitengwa na kutibiwa na 5-iodoindole (0.05 mM na 0.1 mM) au avermectin (10 μg/ml) kama kuangua kwenye maji tasa yaliyosafishwa. Kuangua huku (500 μl; takriban mayai 100) kulihamishiwa kwenye visima vya sahani ya uundaji wa tishu yenye visima 24 na kuwekwa kwenye joto la nyuzi joto 22. Hesabu za L2 zilifanywa baada ya saa 24 za kuangua lakini zilichukuliwa kuwa zimekufa ikiwa seli hazikusogea zikichochewa na waya laini wa platinamu. Jaribio hili lilifanywa katika hatua mbili, kila moja ikiwa na marudio sita. Data kutoka kwa majaribio yote mawili iliunganishwa na kuwasilishwa. Asilimia ya HR imehesabiwa kama ifuatavyo:
Vifo vya mabuu vilipimwa kwa kutumia taratibu zilizotengenezwa hapo awali. Mayai ya Nematodi yalikusanywa na viinitete vilioanishwa kwa kuanguliwa katika maji tasa yaliyosafishwa ili kutoa mabuu ya hatua ya L2. Mabuu yaliyooanishwa (takriban minyoo 500) yalitibiwa na 5-iodoindole (0.05 mM na 0.1 mM) au avermectin (10 μg/ml) na kulelewa kwenye sahani za B. cinerea Petri. Baada ya saa 48 za kuanguliwa kwa joto la 22 °C, minyoo ilikusanywa katika maji tasa yaliyosafishwa na kuchunguzwa kwa uwepo wa hatua za L2, L3, na L4. Uwepo wa hatua za L3 na L4 ulionyesha mabadiliko ya mabuu, ilhali uwepo wa hatua ya L2 haukuonyesha mabadiliko yoyote. Picha zilipatikana kwa kutumia Mfumo wa Upigaji Picha wa Seli za Kidijitali wa iRiS™. Jaribio hili lilifanywa katika hatua mbili, kila moja ikiwa na marudio sita. Data kutoka kwa majaribio yote mawili iliunganishwa na kuwasilishwa.
Sumu ya 5-iodoindole na avermectin kwenye mbegu ilipimwa kwa kutumia vipimo vya kuota kwenye sahani za Murashige na Skoog agar.62 Mbegu za B. oleracea na R. raphanistrum zililowekwa kwanza kwenye maji tasa yaliyosafishwa kwa siku moja, zikaoshwa na 1 ml ya ethanoli 100%, zikasafishwa kwa 1 ml ya bleach ya kibiashara 50% (3% sodium hypochlorite) kwa dakika 15, na kuoshwa mara tano kwa 1 ml ya maji tasa. Mbegu zilizosafishwa kisha zilibanwa kwenye sahani za agar ya kuota zenye 0.86 g/l (0.2X) Murashige na Skoog medium na 0.7% bacteriological agar zenye au bila 5-iodoindole au avermectin. Kisha sahani ziliwekwa kwenye incubation kwa 22 °C, na picha zilichukuliwa baada ya siku 3 za kuota. Jaribio hili lilifanywa katika hatua mbili, ambayo kila moja ilikuwa na marudio sita.
Muda wa chapisho: Februari-26-2025