Vifaa vya mimea na vimelea
Uchoraji wa idadi ya mimea ya mtama unaojulikana kama idadi ya mimea ya mtama inayobadilika (SCP) ulitolewa na Dkt. Pat Brown katika Chuo Kikuu cha Illinois (sasa katika UC Davis). Imeelezwa hapo awali na ni mkusanyiko wa mistari mbalimbali iliyobadilishwa kuwa isiyo na unyeti wa kipindi cha mwanga na urefu mdogo ili kuwezesha ukuaji na ukuaji wa mimea katika mazingira ya Marekani. Mistari 510 kutoka kwa idadi hii ilitumika katika utafiti huu ingawa kutokana na kuota vibaya na masuala mengine ya udhibiti wa ubora, sio mistari yote iliyotumika katika uchanganuzi wa sifa zote tatu. Hatimaye data kutoka kwa mistari 345 ilitumika kwa uchanganuzi wa mwitikio wa chitin, mistari 472 kwa mwitikio wa flg22, na 456 kwa upinzani wa TLS.B. cookeiaina ya LSLP18 ilipatikana kutoka kwa Dkt. Burt Bluhm katika Chuo Kikuu cha Arkansas.
Kipimo cha majibu ya MAMP
MAMP mbili tofauti zilitumika katika utafiti huu flg22, (Genscript catalog# RP19986), na chitin. Mimea ya mtama ilipandwa katika vipandikizi vilivyowekwa kwenye tambarare zilizojaa udongo (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) kwenye chafu. Mimea ilimwagiliwa maji siku moja kabla ya ukusanyaji wa sampuli ili kuepuka unyevu wa ziada wa majani siku ya ukusanyaji.
Mistari hiyo ilipangwa kwa nasibu na, kwa sababu za kimfumo, ilipandwa katika makundi ya mistari 60. Kwa kila mstari, 'vyungu' vitatu vilipandwa na mbegu mbili kwa kila mstari. Makundi yaliyofuata yalipandwa mara tu kundi lililotangulia lilipochakatwa hadi idadi yote ya watu ilipopimwa. Majaribio mawili yalifanyika kwa MAMP zote mbili huku jeni zikibadilishwa nasibu katika kila moja ya majaribio hayo mawili.
Vipimo vya ROS vilifanywa kama ilivyoelezwa hapo awali. Kwa ufupi, kwa kila mstari, mbegu sita zilipandwa katika vyungu 3 tofauti. Kutoka kwa miche iliyotokana, mitatu ilichaguliwa kulingana na ulinganifu. Miche iliyokuwa ilionekana isiyo ya kawaida au ilikuwa mirefu sana au mifupi kuliko mingi haikutumika. Vipuli vinne vya majani vyenye kipenyo cha milimita 3 vilitolewa kutoka sehemu pana zaidi ya jani la 4 la mimea mitatu tofauti ya mtama ya siku 15. Kipuli kimoja kutoka kwa mimea miwili na vipuli viwili kutoka kwa mmea mmoja, huku kipande cha pili kikiwa kidhibiti maji (tazama hapa chini). Vipuli vilielea kimoja kimoja kwenye µl H20 ya 50 katika sahani nyeusi ya visima 96, vimefungwa kwa muhuri wa alumini ili kuepuka kuathiriwa na mwanga, na kuwekwa kwenye joto la kawaida usiku kucha. Asubuhi iliyofuata, suluhisho la mmenyuko lilitengenezwa kwa kutumia kipima chemiluminescent cha 2 mg/ml L-012 (Wako, orodha # 120-04891), 2 mg/ml peroxidase ya horseradish (Aina VI-A, Sigma-Aldrich, orodha # P6782), na 100 mg/ml Chitin au 2 μM ya Flg22. 50 µl ya suluhisho hili la mmenyuko liliongezwa kwenye visima vitatu kati ya vinne. Kisima cha nne kilikuwa kidhibiti cha mfano, ambapo suluhisho la mmenyuko bila MAMP liliongezwa. Visima vinne vilivyokuwa tupu vyenye maji pekee vilijumuishwa pia katika kila sahani.
Baada ya kuongeza myeyusho wa mmenyuko, mwangaza ulipimwa kwa kutumia kisomaji cha microplate cha SynergyTM 2 cha kugundua kwa wingi (BioTek) kila baada ya dakika 2 kwa saa 1. Kisomaji cha sahani huchukua vipimo vya mwangaza kila baada ya dakika 2 wakati wa saa hii 1. Jumla ya masomo yote 31 yalihesabiwa ili kutoa thamani ya kila kisima. Thamani iliyokadiriwa ya mwitikio wa MAMP kwa kila aina ya jenotipu ilihesabiwa kama (thamani ya wastani ya mwangaza wa visima vitatu vya majaribio—thamani ya kisima cha majaribio) -bila thamani ya wastani ya kisima tupu. Thamani za kisima tupu zilikuwa karibu na sifuri kila mara.
Diski za majaniNicotiana benthamiana, mstari mmoja wa mtama wenye mwitikio mkubwa (SC0003), na mstari mmoja wa mtama wenye mwitikio mdogo (PI 6069) pia zilijumuishwa kama vidhibiti katika kila sahani ya visima 96 kwa madhumuni ya kudhibiti ubora.
B. cookeimaandalizi na chanjo ya chanjo
B. cookeiChanjo iliandaliwa kama ilivyoelezwa hapo awali. Kwa ufupi, punje za mtama zililowekwa kwenye maji kwa siku tatu, zikaoshwa, zikachujwa kwenye chupa zenye umbo la koni la lita 1 na kufungiwa kwa saa moja kwa joto la 15psi na 121 °C. Kisha punje zilichanjwa kwa takriban mililita 5 za mycelia iliyokatwa kutoka kwa mmea mpya waB. cookeiLSLP18 hutenganisha na kuachwa kwa wiki 2 kwenye joto la kawaida, ikitikisa chupa kila baada ya siku 3. Baada ya wiki 2, punje za mtama zilizoathiriwa na kuvu zilikaushwa hewani na kisha kuhifadhiwa kwenye 4 °C hadi chanjo ya shambani. Chanjo hiyo hiyo ilitumika kwa jaribio lote na kufanywa mpya kila mwaka. Kwa chanjo, punje 6-10 zilizoathiriwa ziliwekwa kwenye whorl ya mimea ya mtama ya wiki 4-5. Spores zilizozalishwa kutoka kwa kuvu hizi zilianzisha maambukizi katika mimea michanga ya mtama ndani ya wiki moja.
Maandalizi ya mbegu
Kabla ya kupanda shambani, mbegu za mtama zilitibiwa kwa mchanganyiko wa dawa ya kuua magugu, dawa ya kuua wadudu, na safener ulio na ~ 1% ya dawa ya kuua magugu ya Spirato 480 FS, 4% ya dawa ya kuua magugu ya Sebring 480 FS, 3% ya dawa ya kuua magugu ya Sorpro 940 ES. Kisha mbegu zilikaushwa kwa hewa kwa siku 3 ambazo zilitoa mipako nyembamba ya mchanganyiko huu kuzunguka mbegu. Safener iliruhusu matumizi ya dawa ya kuua magugu ya Dual Magnum kama matibabu ya kabla ya kuota.
Tathmini ya Upinzani wa Madoa ya Lengo la Jani
SCP ilipandwa katika Kituo cha Utafiti wa Mazao ya Kati huko Clayton, NC mnamo Juni 14–15 2017 na Juni 20, 2018 katika muundo kamili wa vitalu uliopangwa nasibu na nakala mbili za majaribio katika kila kisa. Majaribio yalipandwa katika safu moja ya mita 1.8 na upana wa safu ya mita 0.9 kwa kutumia mbegu 10 kwa kila shamba. Safu mbili za mpaka zilipandwa kuzunguka pembezoni mwa kila jaribio ili kuzuia athari za ukingo. Majaribio yalichanjwa mnamo Julai 20, 2017 na Julai 20, 2018 ambapo mimea ya mtama ilikuwa katika hatua ya ukuaji wa 3. Ukadiriaji ulichukuliwa kwa mizani ya moja hadi tisa, ambapo mimea isiyoonyesha dalili za ugonjwa ilipewa alama kama mimea tisa na iliyokufa kabisa ilipewa alama kama moja. Ukadiriaji mbili ulichukuliwa mnamo 2017 na usomaji nne mnamo 2018 kuanzia wiki mbili baada ya chanjo kila mwaka. sAUDPC (eneo sanifu chini ya mkondo wa ukuaji wa ugonjwa) ilihesabiwa kama ilivyoelezwa hapo awali.
Muda wa chapisho: Aprili-01-2021