Nyenzo za mimea na pathojeni
Idadi ya watu wanaopanga ramani ya chama cha mtama inayojulikana kama idadi ya watu wanaogeuzwa mtama (SCP) ilitolewa na Dk. Pat Brown katika Chuo Kikuu cha Illinois (sasa kiko UC Davis).Imefafanuliwa hapo awali na ni mkusanyo wa mistari tofauti iliyogeuzwa kuwa kutojali muda wa kupiga picha na kimo kidogo ili kuwezesha ukuaji na ukuzaji wa mimea katika mazingira ya Marekani.Mistari 510 kutoka kwa idadi hii ilitumika katika utafiti huu ingawa kutokana na uotaji mbaya na masuala mengine ya udhibiti wa ubora, si mistari yote iliyotumika katika uchanganuzi wa sifa zote tatu.Hatimaye data kutoka kwa mistari 345 ilitumiwa kwa uchanganuzi wa majibu ya chitin, mistari 472 ya jibu la flg22, na 456 kwa upinzani wa TLS.B. kukiaina ya LSLP18 ilipatikana kutoka kwa Dk. Burt Bluhm katika Chuo Kikuu cha Arkansas.
Kipimo cha majibu ya MAMP
MAMP mbili tofauti zilitumika katika utafiti huu flg22, (Genscript catalog# RP19986), na chitin .Mimea ya mtama ilikuzwa katika viingilizi vilivyowekwa kwenye gorofa zilizojazwa na udongo (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) kwenye chafu.Mimea ilitiwa maji siku moja kabla ya kukusanya sampuli ili kuepuka unyevu wa ziada wa majani siku ya kukusanya.
Mistari hiyo iliwekwa nasibu na, kwa sababu za vifaa, ilipandwa katika makundi ya mistari 60.Kwa kila mstari, 'vyungu' vitatu vilipandwa mbegu mbili kwa kila mstari.Makundi yaliyofuata yalipandwa mara tu bechi la awali lilipochakatwa hadi idadi yote ya watu kutathminiwa.Majaribio mawili yalifanywa kwa MAMP zote mbili na aina za jeni zilizoratibiwa tena bila mpangilio katika kila moja ya misururu miwili.
Uchambuzi wa ROS ulifanyika kama ilivyoelezwa hapo awali.Kwa kifupi, kwa kila mstari, mbegu sita zilipandwa katika sufuria 3 tofauti.Kutoka kwa miche iliyotokana, tatu zilichaguliwa kulingana na usawa.Miche iliyoonekana isiyo ya kawaida au mirefu kwa kiasi kikubwa au mifupi kuliko mingi haikutumika.Diski nne za majani zenye kipenyo cha mm 3 zilikatwa kutoka sehemu pana zaidi ya jani la 4 la mimea mitatu tofauti ya mtama ya siku 15.Diski moja kwa kila jani kutoka kwa mimea miwili na diski mbili kutoka kwa mmea mmoja, huku diski ya pili ikiwa udhibiti wa maji (tazama hapa chini).Diski hizo zilielea kwenye 50 µl H20 kwenye sahani nyeusi ya visima 96, iliyofungwa kwa muhuri wa alumini ili kuepuka kukabiliwa na mwanga, na kuwekwa kwenye joto la kawaida usiku kucha.Asubuhi iliyofuata suluhisho la majibu lilifanywa kwa kutumia 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, katalogi # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidase (Aina ya VI-A, Sigma-Aldrich, katalogi # P6782), na 100 mg/ml Chitin au 2 μM ya Flg22.50 µl ya suluhisho hili la majibu iliongezwa kwa visima vitatu kati ya vinne.Kisima cha nne kilikuwa udhibiti wa dhihaka, ambapo suluhisho la majibu ukiondoa MAMP liliongezwa.Visima vinne tupu vyenye maji pekee vilijumuishwa katika kila sahani.
Baada ya kuongeza suluhu ya majibu, mwangaza ulipimwa kwa kutumia SynergyTM 2 kisoma microplate cha kugundua vitu vingi (BioTek) kila dakika 2 kwa saa 1.Kisomaji sahani huchukua vipimo vya mwangaza kila baada ya dakika 2 katika saa 1 hii.Jumla ya masomo yote 31 ilikokotolewa ili kutoa thamani ya kila kisima.Thamani iliyokadiriwa ya jibu la MAMP kwa kila aina ya jeni ilihesabiwa kama (wastani wa thamani ya mwangaza wa visima vitatu vya majaribio—thamani ya kisima cha mock) -ondoa thamani ya wastani ya kisima tupu.Thamani za visima tupu zilikuwa karibu na sufuri mara kwa mara.
Diski za majani zaNicotiana benthamiana, laini moja ya mtama yenye mwitikio wa hali ya juu (SC0003), na laini moja ya chini inayoitikia mtama (PI 6069) pia zilijumuishwa kama vidhibiti katika kila sahani yenye visima 96 kwa madhumuni ya kudhibiti ubora.
B. kukimaandalizi ya chanjo na chanjo
B. kukiinoculum ilitayarishwa kama ilivyoelezwa hapo awali.Kwa ufupi, nafaka za mtama zililowekwa kwa maji kwa muda wa siku tatu, zikaoshwa, zikachujwa ndani ya chupa zenye ujazo wa lita 1 na kuwekwa kiotomatiki kwa saa moja kwa 15psi na 121 °C.Kisha nafaka zilichanjwa na takriban 5 ml ya mycelia ya macelia kutoka kwa utamaduni safi waB. kukiLSLP18 hujitenga na kushoto kwa wiki 2 kwa joto la kawaida, ikitikisa chupa kila baada ya siku 3.Baada ya wiki 2, nafaka za mtama zilizoshambuliwa na kuvu zilikaushwa kwa hewa na kisha kuhifadhiwa kwa joto la 4 °C hadi kuchanjwa shambani.Chanjo hiyo hiyo ilitumika kwa jaribio zima na kufanywa safi kila mwaka.Kwa chanjo, nafaka 6-10 zilizoshambuliwa ziliwekwa ndani ya mimea ya mtama yenye umri wa wiki 4-5.Spores zinazozalishwa kutokana na fangasi hao zilianzisha maambukizi katika mimea michanga ya mtama ndani ya wiki moja.
Maandalizi ya mbegu
Kabla ya kupanda shambani, mbegu ya mtama ilitibiwa kwa dawa ya kuua ukungu, dawa ya kuua wadudu na mchanganyiko salama zaidi yenye ~ 1% ya kuua kuvu ya Spirato 480 FS, 4% ya kuua kuvu ya Sebring 480 FS, 3% ya sabuni ya kuzuia mbegu ya Sorpro 940 ES.Kisha mbegu zilikaushwa kwa hewa kwa siku 3 ambayo ilitoa mipako nyembamba ya mchanganyiko huu karibu na mbegu.Kisafishaji kiliruhusu matumizi ya dawa ya kuua magugu Dual Magnum kama matibabu ya kabla ya kuibuka.
Tathmini ya upinzani wa Madoa Lengwa ya Majani
SCP ilipandwa katika Kituo Kikuu cha Utafiti wa Mazao huko Clayton, NC mnamo Juni 14-15 2017 na Juni 20, 2018 katika muundo kamili wa kuzuia na marudio mawili ya majaribio katika kila kesi.Majaribio yalipandwa katika mstari mmoja wa mita 1.8 na upana wa mstari wa 0.9 m kwa kutumia mbegu 10 kwa kila shamba.Safu mbili za mpaka ziliwekwa kwenye ukingo wa kila jaribio ili kuzuia athari za makali.Majaribio hayo yalichanjwa Julai 20, 2017 na Julai 20, 2018 ambapo mimea ya mtama ilikuwa katika hatua ya ukuaji 3. Ukadiriaji ulichukuliwa kwa mizani moja hadi tisa, ambapo mimea isiyoonyesha dalili za ugonjwa iliwekwa alama kama tisa na kabisa. mimea iliyokufa ilifungwa kama moja.Makadirio mawili yalichukuliwa mwaka wa 2017 na masomo manne mwaka 2018 kuanzia wiki mbili baada ya kuchanjwa kila mwaka.sAUDPC (eneo sanifu chini ya mkondo wa kuendelea kwa ugonjwa) ilikokotolewa kama ilivyoelezwa hapo awali.
Muda wa kutuma: Apr-01-2021