Protini za DELLA zimehifadhiwavidhibiti ukuajiambayo ina jukumu kuu katika ukuzaji wa mmea katika kukabiliana na ishara za ndani na nje. Kama vidhibiti vya unukuzi, DELLA hufunga vipengele vya unukuzi (TFs) na histone H2A kupitia vikoa vyao vya GRAS na huajiriwa ili kuchukua hatua kwa wakuzaji. Tafiti za hivi majuzi zimeonyesha kuwa uthabiti wa DELLA unadhibitiwa baada ya kutafsiriwa kwa njia mbili: polyubiquitination inayotokana na homoni ya mimea.gibberellin, ambayo inaongoza kwa uharibifu wao wa haraka, na kuunganishwa na modifier ndogo ya ubiquitin-kama (SUMO), ambayo huongeza mkusanyiko wao. Zaidi ya hayo, shughuli ya DELLA inadhibitiwa kwa nguvu na njia mbili tofauti za glycosylation: O-fucosylation huongeza mwingiliano wa DELLA-TF, ambapo urekebishaji wa N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) uliounganishwa na O huzuia mwingiliano wa DELLA-TF. Hata hivyo, jukumu la DELLA phosphorylation haliko wazi kwani tafiti za awali zimeonyesha matokeo yanayokinzana, huku baadhi wakipendekeza kuwa phosphorylation inakuza au kukandamiza uharibifu wa DELLA na wengine wakipendekeza kuwa phosphorylation haiathiri uthabiti wao. Hapa, tunatambua tovuti za phosphorylation katika GA1-3 repressor (RGA), AtDELLA, iliyosafishwa kutoka kwa Arabidopsis thaliana na spectrometry ya wingi na kuonyesha kuwa phosphorylation ya peptidi mbili za RGA katika maeneo ya PolyS na PolyS/T huongeza shughuli za RGA kwa kukuza kuunganisha H2A na ushirikiano wa RGA na wakuzaji lengwa. Hasa, fosforasi haikuathiri mwingiliano wa RGA-TF au uthabiti wa RGA. Utafiti wetu unaonyesha utaratibu wa molekuli ambayo phosphorylation inaleta shughuli za DELLA.
Uchanganuzi wetu wa wingi wa vionjo umebaini kuwa Pep1 na Pep2 zote zilikuwa na fosforasi nyingi katika RGA katika usuli wa Ga1 yenye upungufu wa GA. Mbali na utafiti huu, tafiti za phosphoproteomic pia zimefunua phosphorylation ya Pep1 katika RGA, ingawa jukumu lake bado halijasomwa53,54,55. Kinyume chake, phosphorylation ya Pep2 haijaelezewa hapo awali kwani peptidi hii inaweza tu kugunduliwa kwa kutumia transgene ya RGAGKG. Ingawa mabadiliko ya m1A, ambayo yalikomesha fosforasi ya Pep1, yalipunguza kidogo tu shughuli za RGA kwenye mmea, yalikuwa na athari ya nyongeza yalipojumuishwa na m2A katika kupunguza shughuli za RGA (Kielelezo cha Nyongeza 6). Muhimu zaidi, phosphorylation ya Pep1 ilipunguzwa kwa kiasi kikubwa katika mutant iliyoboreshwa ya GA-sly1 ikilinganishwa na ga1, na kupendekeza kuwa GA inakuza dephosphorylation ya RGA, kupunguza shughuli zake. Utaratibu ambao GA inakandamiza phosphorylation ya RGA inahitaji uchunguzi zaidi. Uwezekano mmoja ni kwamba hii inafanikiwa kupitia udhibiti wa kinase ya protini isiyojulikana. Ingawa tafiti zimeonyesha kuwa usemi wa CK1 protini kinase EL1 umedhibitiwa na GA katika rice41, matokeo yetu yanaonyesha kuwa mabadiliko ya hali ya juu ya homologue ya Arabidopsis EL1 (AEL1-4) haipunguzi fosforasi ya RGA. Kwa kukubaliana na matokeo yetu, utafiti wa hivi majuzi wa phosphoproteomic kwa kutumia mistari ya kuzidisha sauti ya Arabidopsis AEL na ael triple mutant haukutambua protini zozote za DELLA kama substrates za kinase hizi56. Tulipotayarisha muswada, iliripotiwa kuwa GSK3, jeni inayosimba kinase kama GSK3/SHAGGY kwenye ngano (Triticum aestivum), inaweza phosphorylate DELLA (Rht-B1b)57, ingawa phosphorylation ya Rht-B1b na GSK3 haijathibitishwa kwenye planta. In vitro athari za enzymatic mbele ya GSK3 ikifuatiwa na uchambuzi wa spectrometry ya molekuli ilifunua maeneo matatu ya phosphorylation iko kati ya maeneo ya DELLA na GRAS ya Rht-B1b (Mchoro wa 3 wa Nyongeza). Ubadilishaji wa serine hadi alanine katika tovuti zote tatu za phosphorylation ulisababisha kupungua kwa shughuli za Rht-B1b katika ngano ya transgenic, kulingana na matokeo yetu kwamba uingizwaji wa alanine katika Pep2 RGA ulipungua shughuli za RGA. Hata hivyo, majaribio ya uharibifu wa protini katika vitro yalionyesha zaidi kwamba fosforasi inaweza pia kuleta utulivu wa Rht-B1b57. Hii ni tofauti na matokeo yetu yanayoonyesha kuwa vibadala vya alanine katika Pep2 RGA havibadilishi uthabiti wake kwenye mmea. GSK3 katika ngano ni orthologi ya protini 2 isiyojali ya brassinosteroid (BIN2) katika Arabidopsis 57. BIN2 ni kidhibiti hasi cha uashiriaji wa BR, na BR huwasha njia yake ya kuashiria kwa kusababisha uharibifu wa BIN2 58. Tulionyesha kuwa matibabu ya BR hayapunguzi uthabiti wa RGA katika viwango vya 59 vya uthabiti wa fosforasi au fosforasi 2 ya phosphory kupendekeza kuwa RGA haiwezekani kuwa phosphorylated na BIN2.
Data zote za kiasi zilichanganuliwa kitakwimu kwa kutumia Excel, na tofauti kubwa zilibainishwa kwa kutumia jaribio la t la Mwanafunzi. Hakuna mbinu za takwimu zilizotumiwa kubainisha mapema ukubwa wa sampuli. Hakuna data iliyotengwa kutoka kwa uchambuzi; jaribio halikuwa nasibu; na watafiti walifahamu mgao wakati wa majaribio na tathmini ya matokeo. Saizi za sampuli hutolewa katika hadithi za takwimu na faili za data ghafi.
Muda wa kutuma: Apr-15-2025